微小RNA206和连接蛋白43在乳腺癌原发灶及腋窝转移淋巴结中的表达变化

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-0807.2011.01.012

目的

探讨微小RNA-206（miR-206）和连接蛋白（Cx）43在乳腺癌原发灶（PTs）及腋窝转移淋巴结（MLNs）中的表达变化关系。

方法

收集8例经病理学证实为浸润性导管癌的乳腺癌患者，取手术切除的癌旁正常腺体组织、乳腺癌PTs、配对的正常腋窝淋巴结（NLNs）及MLNs，采用实时定量PCR和Western blotting等实验方法，检测正常腺体组织、乳腺癌PTs、配对的NLNs、MLNs中miR-206和Cx43的mRNA和蛋白表达。各组间均数比较行单因素方差分析和Post hoc检验（SNK/LSD）。

结果

与正常乳腺腺体组织比较，乳腺癌PTs和NLNs中miR-206的mRNA表达明显降低，配对的MLNs中miR-206的mRNA表达较PTs和NLNs进一步降低（P＜0.05）。PTs、NLNs和MLNs中Cx43mRNA表达较正常乳腺组织明显降低（P＜0.05），而PTs与MLNs中Cx43 mRNA的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。PTs和NLNs中Cx43蛋白表达较正常乳腺组织明显降低（P＜0.05）；与PTs比较，NLNs中Cx43蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05），而MLNs中Cx43蛋白的表达明显增加（P＜0.05）。

结论

miR-206和Cx43基因的相互作用可能与乳腺癌腋窝淋巴结转移有关。

关键词: 乳腺肿瘤, 远处转移, 腋窝淋巴结, 微小RNA206, 连接蛋白43

Objective

To explore the expression and regulation role of microRNA-206（miR-206）and connexin 43（Cx43）in primary breast tumours（PTs）and metastatic lymph nodes（MLNs）.

Methods

Eight patients of pathologically confirmed infiltrating duct carcinoma of the breast were enrolled.Pericancer normal tissues，primary breast tumors（PTs），paired normal axillary lymph nodes（NLNs）and paired metastatic lymph nodes（MLNs）were obtained from the resected tumors of the patients.The expressions of mRNA and protein of miR-206 and Cx43 in pericancer normal tissue，PTs，NLNs and MLNs were tested using real-time PCR and Western blot techniques.Comparison between groups was performed using one way analysis of variances and SNK or LSD test.

Results

Compared with the normal breast tissues，the mRNA expression of miR-206 in PTs and NLNs decreased significantly，and it further decreased in MLNs compared with PTs and NLNs（P＜0.05）.The mRNA expressions of Cx43 was significantly decreased in PTs，NLNs and MLNs compared with the normal（P＜0.05），but there was no statistical difference between PTs and MLNs（P＞0.05）.The protein expression of Cx43 in PTS and NLNs were significantly lower than in the normal（P＜0.05）.Compared with PTs the protein expression of Cx43 had no statistical difference in NLNs（P＞0.05），but significantly increased in MLNs（P＜0.05）.

Conclusions

The interaction of miR-206 and Cx43 probably play a role in the metastasis of axillary lymph node in breast cancer.

Key words: breast neoplasms, metastasis, lymph nodes, microRNA-206, connexin 43

表1 miR-206、Cx43和GAPDH的PCR引物序列

基因	上游引物	下游引物
miR-206	5'-UGGAAUGUAAGGAAGUGUGUGG-3'	5'-ACACACUUCCUUACAUUCCAUU-3'
Cx43	5'-GGCGTGACTTCACTACTTTTAAGCA-3'	5'-CAGTTGAGTAGGCTTGAACCTTGTC-3'
GAPDH	5'-ATGTTCGTCATGGGTGTGAAC-3'	5'-CCAAAGTTGTCATGGATGACC-3'

表1 miR-206、Cx43和GAPDH的PCR引物序列

基因	上游引物	下游引物
miR-206	5'-UGGAAUGUAAGGAAGUGUGUGG-3'	5'-ACACACUUCCUUACAUUCCAUU-3'
Cx43	5'-GGCGTGACTTCACTACTTTTAAGCA-3'	5'-CAGTTGAGTAGGCTTGAACCTTGTC-3'
GAPDH	5'-ATGTTCGTCATGGGTGTGAAC-3'	5'-CCAAAGTTGTCATGGATGACC-3'

表2 乳腺癌中miR-206与Cx43的mRNA表达

组织	miR-206		Cx43
组织	Ct值（ $\overset{ˉ}{x}$ ±s）	2^-ΔΔCt值	Ct值（ $\overset{ˉ}{x}$ ±s）	2^-ΔΔCt值
N	25.02±0.96	1.000	26.70±0.83	1.000
PTs	18.10±0.62^a	0.021	21.70±0.78^a	0.028
NLNs	18.30±0.65^a	0.024	21.27±2.03^a	0.026
MLNs	17.29±0.37^abc	0.011	20.51±0.65^a	0.023

表2 乳腺癌中miR-206与Cx43的mRNA表达

组织	miR-206		Cx43
组织	Ct值（ $\overset{ˉ}{x}$ ±s）	2^-ΔΔCt值	Ct值（ $\overset{ˉ}{x}$ ±s）	2^-ΔΔCt值
N	25.02±0.96	1.000	26.70±0.83	1.000
PTs	18.10±0.62^a	0.021	21.70±0.78^a	0.028
NLNs	18.30±0.65^a	0.024	21.27±2.03^a	0.026
MLNs	17.29±0.37^abc	0.011	20.51±0.65^a	0.023

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